【2023福建南平知識(shí)大全：干細(xì)胞在鼠@網(wǎng)站小助手】：今天小視頻助手分享的內(nèi)容是——為什么很多實(shí)驗(yàn)用小鼠胚胎干細(xì)胞,,,,，小視頻將詳細(xì)內(nèi)容整理如下： 細(xì)胞生物學(xué)：小鼠胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟

提示：

細(xì)胞生物學(xué)：小鼠胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟

以下是根據(jù)NIH老年病研究所提供的英文的R1胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)protocol整理而成。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)作部分修改。

　　1、一般培養(yǎng)-保持胚胎干細(xì)胞處于未分化狀態(tài)

　　培養(yǎng)基

　　細(xì)胞復(fù)蘇

　　凍存細(xì)胞

　　明膠包被

　　細(xì)胞傳代

　　2 、體外分化

　　培養(yǎng)基

　　包被有多聚鳥氨酸/纖維結(jié)合蛋白的培養(yǎng)板（使用或不使用蓋玻片）

　　體外分化方法

　　注：以下培養(yǎng)針對(duì)于小鼠的R1胚胎干細(xì)胞系，其它胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)可以參考。不過人的胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)不可以采用下面的protocol，需要用專用的protocol和培養(yǎng)基。

　　一般培養(yǎng)——維持ES細(xì)胞處于未分化狀態(tài)

　　ES細(xì)胞培養(yǎng)用含有LIF（白血病抑制因子）和Feed細(xì)胞的培養(yǎng)基（高糖）來阻止細(xì)胞的分化。為細(xì)胞提供包被有0.1％明膠的平板作為粘附細(xì)胞的基質(zhì)。建議每2－3天從達(dá)到80％－90％融合的平板按1：8的比率傳代細(xì)胞一次，細(xì)胞傳代以后，在將細(xì)胞接種在0.1％明膠包被的培養(yǎng)皿之前，通過預(yù)先將細(xì)胞接種在沒有經(jīng)過包被的組織培養(yǎng)板2個(gè)小時(shí)，使分化細(xì)胞粘附，從而將分化和未分化細(xì)胞分開。將細(xì)胞全程置于37℃，5％CO2，100％濕度條件下培養(yǎng)。如果在Feed細(xì)胞，那么就需要采用MMC進(jìn)行處理，抑制Feed細(xì)胞增殖，但仍然能保持其分泌LIF因子的活性。下文中暫不提及Feed細(xì)胞。Feed細(xì)胞可以來源于STO細(xì)胞或原代胚胎成纖維細(xì)胞。

　　培養(yǎng)基

　　ES：

　　配制一20×不含DMEM，HS，LIF的溶液（該溶液也能用于EB培養(yǎng)基——見下文）。分裝在50ml 離心管中，（稀釋為2×，每管42ml），貯存在-20℃。通過將21ml該溶液，HS和LIF加入450ml DMEM中制備培養(yǎng)基，0.22 μm濾膜過濾。貯存于4℃，時(shí)間不要超過2周。

　　貯存液

　　DMEM（高糖）

　　馬血清（HS）

　　L-谷氨酰胺（200mM）

　　MEM NEAA（10mM）

　　HEPES（1M）

　　β-巰基乙醇（55Mm）

　　PEST

　　LIF

　　復(fù)蘇細(xì)胞

　　細(xì)胞被凍存在10％二甲基亞砜（DMSO）中防止結(jié)晶的形成，結(jié)晶的形成會(huì)損害細(xì)胞。然而，二甲基亞砜對(duì)細(xì)胞有毒性，快速的進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇是很重要的。

　　步驟：

　　1.從液氮中取出一管細(xì)胞；

　　2.將凍存管置于37℃水浴中2分鐘（或放到管內(nèi)溶液恰好完全溶解）；

　　3.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到一15ml Falcon管中；

　　4.加入5ml ES培養(yǎng)基（用培養(yǎng)基沖洗凍存管）；

　　5.離心3分鐘；

　　6.棄上清，用2ml ES培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，至少吹打10次；

　　7.接種在明膠包被（見下文）的6孔或6cm組織培養(yǎng)皿；

　　8.孵育。

為什么很多實(shí)驗(yàn)用小鼠胚胎干細(xì)胞

提示：

為什么很多實(shí)驗(yàn)用小鼠胚胎干細(xì)胞

做實(shí)驗(yàn)之所以常用小白鼠，主要有以下幾個(gè)原因：
第一：老鼠中的小白鼠的基因序列和人類的差不多，它的全基因組和人類的相似度極高，很多人類難以治愈的疾病可以在小白鼠身上找到相似性狀，從而加以實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)治病基因。

第二：實(shí)驗(yàn)專用白鼠的生物學(xué)意義較大，培育出的小鼠幾乎完全沒有個(gè)體差異(生理上)。生理上沒有個(gè)體差異是否意味著氣質(zhì)上沒有差異尚不明了，不過選擇純系實(shí)驗(yàn)白鼠主要還是為了盡可能的減少先天的個(gè)體差異。

第三：數(shù)量充足，許多實(shí)驗(yàn)需要統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，這就要求一定的數(shù)量，大白鼠和小白鼠，特別是小白鼠，在人工繁殖條件下，能滿足這一要求。還有動(dòng)物等級(jí)，小白鼠好歹也是哺乳動(dòng)物，除了體形小，與其它哺乳動(dòng)物的進(jìn)化水平相比并不差。體形小反而成為人工繁殖喂養(yǎng)的有利條件。

第四：其實(shí)很多實(shí)驗(yàn)用猩猩等與人更近似的動(dòng)物做最好，但使用猩猩太昂貴了。許多實(shí)驗(yàn)，比如認(rèn)知類的，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后時(shí)需要將動(dòng)物殺死，來檢查其內(nèi)部變化的。這樣，大量的實(shí)驗(yàn)肯定就不能用比較“貴重”的猩猩了。

第五：由于這種大型的哺乳動(dòng)物受到動(dòng)物保護(hù)協(xié)會(huì)的保護(hù)。那么多不“人道”的實(shí)驗(yàn)也就受到限制了。即使用的是小白鼠，動(dòng)協(xié)的人仍然有抗議呢。

第六：一些實(shí)驗(yàn)用不著那些大型的，復(fù)雜的動(dòng)物來做。